Western Blot 工作流：从蛋白提取到封闭与显影的检查点

不同裂解强度会改变蛋白回收范围，也可能影响后续定量和抗体识别。选择裂解液时应结合目标蛋白所在区室、是否需要保留复合物以及后续实验类型。

上样前应统一蛋白定量方法、稀释背景和样本处理步骤。批次间比较时，记录样本来源、裂解比例、离心条件和保存历史。

转膜不均、膜干燥或气泡会形成局部异常；封闭剂与抗体体系不兼容则更容易形成广泛背景。两类问题需要不同修正路径。

检测磷酸化等特殊靶标时，应先核对封闭成分与抗体说明。无蛋白封闭液可作为候选之一，但仍需用目标抗体和样本体系验证。

曝光过度可以放大背景，但它通常不是背景产生的起点。若缩短曝光仍无法改善，应回到抗体浓度、封闭、洗膜和样本质量逐项排查。

同一项目宜保留原始曝光文件和参数，不只保存经过对比度调整的结果图。