先看结论：三个决策点
- 低拷贝结果先看重复孔和阴性对照。
- 将提取、逆转录和扩增拆开验证。
- 增加模板量前先排查抑制物和反应兼容性。
先检查对照与重复孔形态
低拷贝条件下随机波动更容易被放大。先检查无模板、无 RT、提取空白和阳性对照是否符合预期，再判断样本信号。
重复孔出现不一致时，应保留原始扩增曲线，不只记录汇总数值。
- 无模板对照
- 无 RT 对照
- 阳性对照
- 原始扩增曲线
分段验证工作流
同一模板在不同扩增体系中的表现、同一 RNA 在不同逆转录条件中的表现，可以帮助判断问题环节。
若样本背景复杂，还应考虑反应抑制物以及纯化残留。
- 提取阶段
- 逆转录阶段
- 扩增阶段
- 仪器与程序
建立项目专属接受标准
依据研究目的设置重复孔、对照和重复实验的接受标准，并在项目开始前固定。
本页仅用于科研流程设计，不用于临床诊断性能判断。
- 预先定义判读规则
- 记录排除原因
- 独立批次复核
- 结果限科研用途
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FAQ
常见问题
低拷贝波动大时是否应直接增加循环数？
不宜直接处理。应先查看阴性对照、样本质量、逆转录、抑制物和引物/探针表现。